Método de Coloração de Gram

O artigo a seguir, é uma parte da monografia elaborada por mim, para a obtenção do título de Bacharel em Química com Atribuições Tecnológicas. Em especial, este artigo é o Anexo I da monografia.

Material

• Culturas bacterianas em meio sólido ou líquido, corante cristal violeta, corante fucsina básica, lugol, etanol-acetona (1:1 v:v), lâmina de microscopia; microscópio óptico e bico de Bunsen.

Composição dos corantes

• Solução de cristal violeta

• Solução A => cristal violeta 2,0 g + etanol:acetona 20 ml
• Solução B => oxalato de amônia 0,8 g + água destilada 100 ml

Misturar as soluções A e B e deixar em repouso por 24 horas antes do uso.

• Solução de fucsina => fucsina 1,0 g + água destilada 100 ml

• Solução de lugol => iodo 1,0 g + iodeto de potássio 2,0 g + água destilada 100 ml

  

Procedimentos

• Preparo do esfregaço

Suspender uma pequena porção da amostra bacteriana a ser corada em uma gota de água ou solução salina 0,85%, sobre uma lâmina de microscópio, espalhando a gota. Este procedimento deve ser feito com um alça bacteriológica flambada ou um palito de madeira esterilizado. Deixar o material secar e, em seguida, fixá-lo com calor, flambando rapidamente a lâmina acima da chama de um bico de Bunsen.

• Aplicação do corante primário

Cobrir toda a sua superfície da lâmina com o corante cristal violeta; deixar em repouso por um minuto. Descartar o excesso de corante ou enxaguar a lâmina com água.

• Aplicação do fixador

Cobrir toda a sua superfície da lâmina com lugol; deixar em repouso por um minuto. Descartar o excesso do fixador ou enxaguar a lâmina com água.

• Descoloração

Com a lâmina inclinada, despejar algumas gotas de álcool-acetona 1:1 v:v (descolorizador) para remover o complexo cristal violeta-lugol de células Gram-negativas. Este procedimento não pode exceder a cinco segundos, pois o descolorizador poderá remover o corante cristal violeta das células Gram-positivas. Em seguida, enxaguar a lâmina com água para remover excesso de solvente.

• Aplicação do corante secundário

Cobrir toda a sua superfície da lâmina com o corante fucsina básica; deixar em repouso por um minuto. Enxaguar a lâmina com água e tocar as bordas com papel absorvente para remoção do excesso de água.

Referência:

MORETTI, Paulo E. Microbiologia, Fundamentos e Aplicações - Métodos em Microbiologia – Coloração de Gram. Americana: 2007. Disponível em: <http://www.fam.br/microrganismos/metodo_coloracao_de_gram.htm>. Acesso em: 19 fevereiro 2008.


COMO CITAR ESTE ARTIGO (POST)



SALVADOR, Érica de Liandra. Caracterização de biossurfactante extraído de cultura de Bacillus subtilis por métodos de espectroscopia RAMAN e de Infravermelho. Trabalho de Conclusão de Curso [Bacharel em Química com Atribuições Tecnológicas]: Centro Universitário Fundação Santo André – FAFIL. Santo André, 2008. 52 f. Disponível em: http://infinito-e-diverso-els.blogspot.com/. Acesso em: (coloque aqui a data que você acessou o artigo).


Observação:

Não vou disponibilizar esta monografia na íntegra, como fiz com a monografia “Desdobrando características e propriedades apresentadas por azocorantes e sua utilização na fabricação de filmes nanoestruturados com aplicações ópticas” também disponível neste blog, contudo, caso alguém queira saber mais sobre o projeto desenvolvido nela, pode visitar os demais posts no blog que trazem partes dela (vide final do post) ou, caso não encontre nesses posts a parte que lhe interessa, deixe um comentário, ou envie-me um e-mail.

Você poderá encontrar outras partes dessa monografia em:

Bacillus subtilis
Bactérias: curiosidades e utilidades!
Métodos de Coloração de Gram.
Surfactantes (Tensoativos): Introdução.